Фотодинамическая терапия (ФДТ) как новая световая технология обладает преимуществами неинвазивности и низкой токсичности, и имеет важные клинические перспективы. В настоящее время исследования ФДТ в основном основаны на статически культивируемых опухолевых клетках, что значительно отличается от реальной опухолевой микросреды и часто приводит к низкой клинической эффективности ФДТ. В данной работе разработана микрофлюидная биочипа для опухолевой ФДТ и приготовлен флуоресцентный нанодатчик (λ_ex = 410 нм, λ_em = 460 нм) для флуоресцентного датирования производства синглетного кислорода в процессе ФДТ, а также проведён анализ основных факторов, влияющих на инактивацию опухолевых клеток с помощью ФДТ. Результаты показали, что снижение pH среды с 7,4 до 6,8 (оспособление среды) и увеличение скорости инъекции с 5 мкл/ч до 20 мкл/ч (повышение сдвигового напряжения) уменьшают эффективность фагоцитоза нанофотосенсибилизатора опухолевыми клетками; на раннем этапе ФДТ при достаточном содержании кислорода (<30 с) доза фотосенсибилизатора, микрокислотность и механические микросреды слабо влияют на выход синглетного кислорода, а степень ингибирования клеток близка; на позднем этапе ФДТ (30~180 с) содержание кислорода снижается, выход синглетного кислорода падает, и различия в фототоксичности клеток, обусловленные различными параметрами опухолевой микроокружения, становятся значительными. Эта работа с помощью флуоресцентного датирования исследует производство синглетного кислорода в процессе ФДТ при имитации опухолевой микросреды и предоставляет полезную информацию для продвижения клинического развития опухолевой ФДТ.